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申 请 号:CN201710265990

专利名称:一种紫参薯种质离体保存和恢复方法

专利权人:闽南师范大学

交易方式:协议

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专利基本信息:

名称:一种紫参薯种质离体保存和恢复方法
申请号:CN201710265990
申请日期:2017-04-21
申请人:闽南师范大学
发明人:蔡月琴; 陆銮眉
地址:363000 福建省漳州市芗城区县前直街36号
主分类号:A01H4/00
分类号:A01H4/00
主权项:一种紫参薯种质离体保存和恢复的方法,包括如下步骤:1)外植体的获得与消毒处理取健康、无病害的紫参薯块茎中部切块盆栽沙培获得紫参薯幼苗,切取幼苗带节嫩茎于烧杯中,流水冲洗1~2h后,用洗衣粉浓溶液15~30min,自来水荡洗干净后,转置超净工作台上用体积浓度为70%酒精浸泡30~60s,转入2%次氯酸钠溶液中浸泡10~15min,然后无菌水漂洗3-5次,每次漂洗时间为1~3min;无菌水洗净后获得消毒的紫参薯嫩茎外植体;2)无菌苗的获得:将步骤1)已消毒的嫩茎放于超净工作台上,切成带单节茎段,长1.5-2.5cm,同时切除叶柄、枝茎等多余部分,接种于以MS培养基为基本培养基,附加激动素1.0~2.0mg/L、萘乙酸0.2~0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7~8g/L的固体诱导培养基上;培养基用1mol/L HCl或1mol/L NaOH,调整pH值到5.7-5.9,并加入0.05-0.15%活性炭,搅拌均匀后,分装于组培瓶,在120-125℃下灭菌20-30min后,拿出冷切后即可用;将消毒处理好的外植体接种于上述诱导培养基培养,培养条件为光照强度1900-2100LuX,光照时间8~12h/d,温度为25±2℃,培养3~4周后为获得无菌试管苗;3)试管苗的继代培养:取步骤2)获得的无菌试管苗,于超净工作台上用手术剪刀剪除叶片后,将试管苗切成带单节茎段,长为1~1.5cm,节上部分长为节下部分长的1.5-2.5倍,取茎段形态学下端分别插入固体保存培养基和对照继代培养基中;所述固体保存培养基以1/3~1/2MS为基本培养基,添加激动素1.9-2.1mg/L、萘乙酸0.19-0.21mg/L、20~30mg/L甘露醇、50-70mg/L蔗糖、7~8mg/L琼脂、0.05-0.15%活性炭,pH=5.7-5.9;培养条件均为光照强度1900-2100LuX,光照时间8~12h/d,温度为25±2℃;4)继代恢复培养:取步骤3)已在固体保存培养基中保存培养的紫参薯试管苗,切取试管苗带单节茎段,长为0.4-0.6cm,接种于恢复培养基,所述的恢复培养基以MS为基本培养基,添加激动素0.9-1.1mg/L、萘乙酸0.19-0.21mg/L、25-35mg/L蔗糖、7~8mg/L琼脂、0.05-0.15%活性炭,pH=5.7-5.9;培养条件为光照强度2000LuX,光照时间8~12h/d,温度为25±2℃。
摘要:本发明公开了一种紫参薯种质的离体保存和恢复方法,其包括以下步骤:取健康、无病害的紫参薯块茎的中部切块盆栽沙培获得幼苗,以幼苗茎段为外植体经消毒处理接种于固体培养基中,获得无菌试管苗。切取无菌试管苗茎段接于保存培养基 : 1/3~1/2MS+2.0mg/L KT+0.2mg/L NAA+20~30mg/L甘露醇+60mg/L蔗糖+7mg/L琼脂+0.1%AC,pH=5.8。常温条件下,试管苗能健壮保存16个月以上,存活率达85%以上;与常规继代培养苗相比,其植株根系较粗壮发达,节间明显缩短,叶片小,分蘖多,叶色深。试管苗继代恢复生长后,植株生长正常,与常规组培苗无差异。

专利详细信息:



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公开
法律状态公告日:2017-09-15
法律状态:公开
描述信息:公开
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2017-09-15 公开 js/timeglider/js/timeglider/icons/verticalLineGray.png 50
2017-10-17 实质审查的生效 js/timeglider/js/timeglider/icons/verticalLineGray.png 50
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