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公开
法律状态公告日：2019-11-19
法律状态：公开
描述信息：公开
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申 请 号：CN201910765147
专利名称：一种轮状病毒感染斑马鱼模型建立的方法
专利权人：广东医科大学
交易方式：协议
参考价格： 面议
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| 名称： | 一种轮状病毒感染斑马鱼模型建立的方法 |
|---|---|
| 申请号： | CN201910765147 |
| 申请日期： | 2019-08-19 |
| 申请人： | 广东医科大学 |
| 发明人： | 赵文昌; 宋丽军 |
| 地址： | 523000 广东省东莞市松山湖科技园新城大道1号 |
| 主分类号： | A01K61/10 |
| 分类号： | A01K61/10 |
| 主权项： | 1.一种轮状病毒感染斑马鱼模型建立的方法，其特征在于：它包括以下步骤： 步骤一、斑马鱼的选取：选取5dpf、一月龄、三月龄的斑马鱼进行实验； 步骤二、RV的培养与扩增：在MA104细胞上进行SA-11株和Wa株RV的培养与扩增； 步骤三、病毒滴定测定：生长状态良好的MA104细胞，进行常规消化后离心，倒去液体，然后加培养基稀释计数后接种于孔板上进行培养，待细胞贴壁，将病毒株与胰酶混合孵育； 将RV病毒液用无FBS的DMEM培养液稀释，取出贴壁的MA104细胞，用预热的PBS洗一遍，再用无FBS的DMEM培养液洗一遍，将预先孵育好的病毒液加入到孔板中，设置正常对照组，正常对照组加无FBS的DMEM培养液，放入培养箱中孵育；一定时间后吸出病毒液，加入无FBS的DMEM培养液，放入培养箱中培养；于不同时间点观察RV感染细胞后的病理状态，当观察最低稀释度病毒液的孔内不再出现CPE时，记录；同时，避光条件加入MTT试剂，用酶标仪检测490nm波长条件下样品吸光度，按照Reed and Muench的方法计算出病毒的TCID50； 步骤四、SA-11株感染方式和鱼龄的选择：分别通过腹腔注射、灌胃感染、浸泡感染三种方式，感染一月龄、三月龄的斑马鱼，每组各若干只，设正常对照组；每隔一定时间观察斑马鱼的外观体征，包括形态、活动情况、肛门处是否红肿，死亡情况； 步骤五、ELISA法检测RV感染斑马鱼肠道VP6抗原：按照步骤三的方法优选出最佳感染方式、鱼龄，进一步考察斑马鱼对SA-11株和Wa株的易感性，分别用两种病毒株对一月龄、三月龄斑马鱼按照最佳感染方式处理；感染1天后麻醉处死斑马鱼，解剖分离肠道部位，按照试剂盒说明书进行； 步骤六：荧光sytoRNA标记的RV感染斑马鱼：用荧光染料sytoRNA标记的RV，感染5dpf的斑马鱼，斑马鱼在孔板中培养，每孔一只；分为正常组，syto-SA-11组，syto-WA组，每组3只，分别加入正常培养水、syto-SA-11病毒液和syto-WA病毒液，感染一定时间后更换成正常培养水，活细胞成像仪下观察荧光的分布。 |
| 摘要： | 本发明涉及模型建立技术领域，特别是涉及一种轮状病毒感染斑马鱼模型建立的方法，包括步骤一、斑马鱼的选取；步骤二、RV的培养与扩增；步骤三、病毒滴定测定；步骤四、SA‑11株感染方式和鱼龄的选择；步骤五、ELISA法检测RV感染斑马鱼肠道VP6抗原；步骤六：荧光sytoRNA标记的RV感染斑马鱼；通过模型建立可知，RV可感染5dpf至一月龄的斑马鱼，同时建立了RV感染斑马鱼脑病的模型，为研究RV感染，尤其是RV性脑病提供了技术平台。因此，利用本方法能够建立稳定可靠的RV感染斑马鱼的模型，为RV病理机制、抗病毒药物筛选等方面的研究提供强有力的技术手段。 |
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|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 2019-11-19 | 公开 | js/timeglider/js/timeglider/icons/verticalLineGray.png | 50 |
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curl exec failed 'Couldn't connect to server'
错误位置
TRACE
#1 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/Application/Home/Controller/PraiseController.class.php(56): Yar_Client->theme_bar('get_bar_id', Array)
#2 [internal function]: Home\Controller\PraiseController->get_bar_id_by_from_id()
#3 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/Library/Think/App.class.php(173): ReflectionMethod->invoke(Object(Home\Controller\PraiseController))
#4 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/Library/Think/App.class.php(110): Think\App::invokeAction(Object(Home\Controller\PraiseController), 'get_bar_id_by_f...')
#5 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/Library/Think/App.class.php(204): Think\App::exec()
#6 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/Library/Think/Think.class.php(120): Think\App::run()
#7 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/ThinkPHP.php(97): Think\Think::start()
#8 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/index.php(27): require('/home/ftp/1520/...')
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