FILE: /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/Application/Home/Controller/PraiseController.class.php LINE: 56
公开
法律状态公告日：2019-10-25
法律状态：公开
描述信息：公开
申 请 号：CN201910482199
专利名称：中华鳖类固醇生成因子-1多克隆抗体的制备方法及应用
专利权人：河南师范大学
交易方式：协议
参考价格： 面议
加入对比
索取出让意向书
| 名称： | 中华鳖类固醇生成因子-1多克隆抗体的制备方法及应用 |
|---|---|
| 申请号： | CN201910482199 |
| 申请日期： | 2019-06-04 |
| 申请人： | 河南师范大学 |
| 发明人： | 马晓; 张超; 吴利敏; 刘慧芬; 李学军; 冯军厂 |
| 地址： | 453007 河南省新乡市建设东路46号 |
| 主分类号： | C07K16/28 |
| 分类号： | C07K16/28; C07K16/06; C07K14/705; C12N15/70; G01N33/68; G01N27/447; C12R1/19 |
| 主权项： | 1.一种中华鳖类固醇生成因子-1多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤一、中华鳖Sf-1基因的克隆： 提取中华鳖总RNA，用M-MLV反转录酶合成cDNA第一链，于温度为-80℃保存；根据GenBank数据库中的Sf-1基因序列，设计第一对特异性引物，进行PCR扩增，获得中华鳖Sf-1基因cDNA片段；进行5′RACE-PCR和3′RACE-PCR扩增，获得中华鳖Sf-1基因cDNA片段的5′末端和3′末端，拼接获得中华鳖Sf-1基因全长cNDA序列；中华鳖Sf-1基因的核苷酸和氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示； 步骤二、中华鳖Sf-1基因重组表达载体的构建： 构建中华鳖Sf-1基因全长cDNA序列，设计第二对特异性引物Sf-1-F1和Sf-1-R1，分别在上、下游引物添加BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点；以中华鳖cNDA为模板，Sf-1-F1和Sf-1-R1为引物，进行PCR扩增；将PCR产物和pET-32a(+)表达载体进行双酶切，回收纯化，连接转化大肠杆菌DH5α，获得重组表达载体pET-Sf-1； 步骤三、中华鳖Sf-1重组蛋白的诱导表达和纯化及Western Blot进行特异性分析： 将步骤二得到的重组表达载体pET-Sf-1转化大肠杆菌BL21(DE3)，在含有100mg/mL氨苄抗性的LB培养液中培养至OD值为0.6时，加入IPTG进行诱导；经离心收集菌体、PBS重悬和超声波破碎后，加入5×上样缓冲液进行12％SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达情况； 以1％的接种量将能表达重组蛋白的BL21添加到含有100mg/mL氨苄抗性的LB培养基中，大量培养，诱导表达；将诱导好的菌液离心，收集菌体用变性结合缓冲液溶解，超声波破碎，再离心收集上清，上样、结合、洗脱、透析，获得纯化的中华鳖Sf-1重组蛋白；SDS-PAGE电泳检测纯化的中华鳖Sf-1重组蛋白； 步骤四、多克隆抗体的制备： 将步骤三纯化的pET-Sf-1重组蛋白作为抗原，对小鼠进行免疫，按体积比1 : 1的比例加入弗氏完全佐剂，采用腹部皮下多点注射；加强免疫选用弗氏不完全佐剂；末次免疫10天后，进行全血分离，收集鼠抗血清，纯化得到中华鳖Sf-1多克隆抗体。 |
| 摘要： | 本发明实施例公开了一种中华鳖中华鳖类固醇生成因子‑1多克隆抗体的制备方法及应用，所述中华鳖中华鳖类固醇生成因子‑1多克隆抗体的制备方法包括(1)中华鳖Sf‑1基因的克隆；(2)中华鳖Sf‑1基因重组表达载体的构建；(3)中华鳖Sf‑1重组蛋白的诱导表达和纯化及Western Blot进行特异性分析；(4)多克隆抗体的制备。本发明采用分子生物学和基因工程的方法，构建了中华鳖Sf‑1基因的重组表达载体，诱导表达，亲和层析获得纯化的重组表达蛋白。本发明的方法制备的中华鳖Sf‑1多克隆抗体可用于免疫组化、免疫印迹实验要求，建立体外免疫分析、研究中华鳖Sf‑1的功能以及中华鳖免疫荧光染色激光共聚焦显微观察，还可用于龟鳖类、爬行类、鸡的类固醇生成因子‑1的免疫检测。 |
| start date | end date | title | description | icon | date limit | importance | link | modal |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 2019-10-25 | 公开 | js/timeglider/js/timeglider/icons/verticalLineGray.png | 50 |
:( FILE: /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/Application/Home/Controller/PraiseController.class.php LINE: 56 #0 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/Application/Home/Controller/PraiseController.class.php(56): Yar_Client->__call('theme_bar', Array) ThinkPHP3.2.3 { Fast & Simple OOP PHP Framework } -- [ WE CAN DO IT JUST THINK ]
curl exec failed 'Timeout was reached'
错误位置
TRACE
#1 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/Application/Home/Controller/PraiseController.class.php(56): Yar_Client->theme_bar('get_bar_id', Array)
#2 [internal function]: Home\Controller\PraiseController->get_bar_id_by_from_id()
#3 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/Library/Think/App.class.php(173): ReflectionMethod->invoke(Object(Home\Controller\PraiseController))
#4 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/Library/Think/App.class.php(110): Think\App::invokeAction(Object(Home\Controller\PraiseController), 'get_bar_id_by_f...')
#5 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/Library/Think/App.class.php(204): Think\App::exec()
#6 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/Library/Think/Think.class.php(120): Think\App::run()
#7 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/ThinkPHP/ThinkPHP.php(97): Think\Think::start()
#8 /home/ftp/1520/ipa361_com-20150420-MrH/ipa361.com/mapi/index.php(27): require('/home/ftp/1520/...')
#9 {main}
">查看全部评论
